IgA的純化操作步驟

更新時間：2013-08-23　點擊量：3619

IgA的純化

血清中IgA的含量較低，一般從乳汁中提取分泌型IgA。

【材料和試劑】

（1）人初乳Xml。

（2）生理鹽水（NS），HCl。

（3）2mol/L Tris，0.1mol/L pH6.3 PB。

（4）0.01mol/L， pH7.5（含0.1mol/L NaCl）和0.01mol/L，pH7.7（含0.25mol/L NaCl）的PB。

【操作步驟】

（1）取Sephadex G-200 25g，經(jīng)蒸餾水充分膨脹后，以0.01mol/L，pH6.3的PB平衡并裝柱，柱床體積為2.5cm×100cm。

（2）將10ml NS緩慢加入初乳中，混勻，43000r/min 4℃離心60min。

（1）吸出中層乳清液，以1mol/L HCl調(diào)至pH4.0，4℃ 24000r/min離心30min。

（2）吸取上清以2mol/L Tris 調(diào)至pH7.3，同上離心，取上清，以0.45μm硝酸纖維素膜過濾。

（3）收集濾出液過Sephadex G-200層析柱，以0.01mol/L，pH6.8 的PB低溫洗脫，0.3～0.5ml/min，分部收集，并以紫外監(jiān)測儀280nm監(jiān)測。

（4）*峰以IgM為主，第二峰為IgA，第三峰為IgG，收集合并第二峰各管，裝入透析袋中。

（5）對0.01mol/L，pH7.5（含0.1mol/L NaCl）的PB透析4～6h。

（6）過DEAE-Sephadex A-50柱，以0.01mol/L，pH7.5（含0.1mol/L NaCl）的PB洗脫至OD 280nm< 0.02。

（7）改用含0.25mol/L NaCl的PB洗脫，分部收集，280nm測蛋白峰，收集合并含蛋白的洗脫峰，濃縮后置-20℃保存。

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